兔抗MAD2抗体亲和纯化：高效免疫沉淀，并避免与其它有丝分裂检查点蛋白交叉反应

一、产品概述MAD2mitotic arrest deficient 2有丝分裂阻滞缺陷蛋白2是纺锤体组装检查点的关键组分负责确保在后期 onset 之前所有染色体正确排列在赤道板上。MAD2是MCC复合体包含BubR1、Bub3、Cdc20和MAD2的亚基之一该复合体可抑制APC/C后期促进复合物/ cyclosome。MAD2受MAD1调控。MAD2功能异常可导致染色体不稳定性与肿瘤发生密切相关。本文介绍的由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的兔抗MAD2抗体亲和纯化货号A300-301A 是一款针对人源MAD2蛋白的高特异性多克隆抗体可识别人和小鼠MAD2适用于免疫沉淀和免疫印迹应用。二、产品规格参数 | 详细信息靶标 | MAD2反应种属 | 小鼠、人应用 | IP、WB宿主 | 兔克隆类型 | 多克隆抗体形式 | 完整IgG免疫原 | 位于第155位氨基酸至C末端之间的区域具体映射至SwissProt Q13257编号下残基150至C末端残基205同种型 | IgG偶联物 | 未偶联纯度 | 抗原亲和纯化抗原种属 | 人浓度 | 1000 µg/mL1 mg/mL储存条件 | 2–8°C保质期 | 自收到之日起1年缓冲液 | Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液pH 7–8含0.09% 叠氮化钠生产流程 | 使用固定在固相载体上的MAD2特异性表位进行亲和纯化。免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定1 mg/mL IgG在A280下吸光度为1.4三、推荐应用与实验条件本抗体经验证可用于免疫沉淀和免疫印迹两种应用类型。以下为推荐条件。3.1 免疫印迹Western Blot, WB推荐稀释范围1:2,000 – 1:10,000封闭及抗体稀释液5% 牛奶-TBST一抗孵育条件过夜孵育二抗选择检测细胞裂解液使用山羊抗兔IgG重链轻链抗体货号A120-101P检测免疫沉淀样品使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体封闭缓冲液中需添加5%正常猪血清货号S100-0203.2 免疫沉淀Immunoprecipitation, IP推荐用量6 µg 抗体 / mg 细胞裂解物总蛋白四、储存与稳定性储存温度2–8°C有效期自收到之日起1年内按照指示条件储存可保持最佳性能缓冲液成分Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液pH 7–8含0.09% 叠氮化钠作为防腐剂重要提示叠氮化钠会抑制过氧化物酶活性。若下游检测采用HRP偶联二抗及化学发光底物建议在使用前通过脱盐柱或透析去除叠氮化钠。若采用荧光检测或非酶促检测体系则无需去除避免反复冻融建议分装保存于2–8°C避免冷冻反复冻融可能导致抗体变性五、产品优势总结优势 | 说明高浓度 | 1000 µg/mL1 mg/mL满足大量免疫沉淀和多次实验需求双物种反应性 | 同时识别人和小鼠MAD2扩展应用范围亲和纯化 | 抗原特异性纯化低非特异性背景明确表位区域 | 免疫原位于155–C端150–205便于验证和交叉反应预测含轻链特异性检测建议 | 提供免疫沉淀后Western Blot的优化方案避免轻链干扰MAD2分子量与轻链接近长保质期 | 2–8°C稳定储存1年六、注意事项总结1. MAD2分子量~24 kDa与兔IgG轻链~25 kDa接近免疫沉淀后的Western Blot必须使用抗兔IgG轻链特异性二抗否则轻链信号会严重遮挡目标条带。2. 叠氮化钠干扰HRP检测使用前根据检测体系决定是否去除。3. 物种交叉反应已验证人、小鼠其他物种需自行验证。4. 储存2–8°C不可冷冻。七、结论兔抗MAD2抗体亲和纯化是一款高浓度1 mg/mL、高特异性的多克隆抗体适用于人和小鼠样本中MAD2蛋白的免疫沉淀和免疫印迹检测。其免疫原位于MAD2的C端区域150–205可有效识别全长MAD2。特别值得注意的是由于MAD2分子量与兔IgG轻链非常接近产品说明书中明确提供了免疫沉淀后Western Blot的优化检测方案使用抗兔IgG轻链HRP抗体及正常猪血清这一细节设计对于获取可靠的IP-WB数据至关重要。该抗体是研究纺锤体组装检查点、染色体不稳定性及肿瘤发生机制的有力工具。研究者可参考上述推荐条件进行实验优化以获得高质量的检测结果。